操作。第一步，NCM的处理。在NCM上划6毫米x6毫米的方格，然 后在方格中央用直径5毫米的圆形打孔器在膜平滑面按顺序压痕迹, 作为点样部位，将NCM置于蒸馏水中浸泡，完全湿透后。取出、晾 干后备用。第二步，点样。取2微升抗原液滴于圆圈内，自然干燥。
  第三步，封闭。将NCM置于封闭液（1摩尔/升PH72。PBS 加入小牛血清）中，37度下作用1小时，取出后用洗涤液 (1摩尔/升pH7。 2 PBS加人吐温-20)漂洗4次，每次3 分钟。第四步，将待检血清做系列稀释。分别为1 : 10、1 : 50、1 : 200、 1 : 400、 1 : 800、 1 : 1600、 1 : 3200、 1 : 6400、 1 : 12800、 1:25600,同时做阴性和阳性血清对照，将上述血清加到NCM上的 点样部位、置湿盒中37度下作用1。
   5小时，同上洗涤。第五步，将NCM置于稀释到工作的酶标兔抗鸡Ig G液中， 37度下作用1小时，同上洗涤。第六步，显色。将NCM侵人底物溶液中，闭光作用10分钟。第七步，终止显色。将NCM置于蒸馏水中浸泡3分钟，自然 干燥。第八步，结果判定。
  压迹中间呈现棕色斑点者判定为阳性 (+),与阴性对照相同不呈现斑点者判定为阴性（-)。以出现阳性 反应的血清最高稀释度为该血清的DO度—ELISA效价。